Le bon outil pour la bonne tâche:
Stéréomicroscope: pour les manipulations et le suivi des cultures.
Le stéréomicroscope, aussi appelé binoculaire est l’outil de base indispensable. Compte tenu de la taille des spores et des hyphes, il est nécessaire de travailler sous le stéréomicroscope. La plupart du temps, on utilisera un grossissement de 20X, mais on va souvent apprécier un grossissement de l’ordre de 40X ou plus afin de préciser certaines observations. On l’utilisera pour:
- Inoculation monosporale ou en vrac
- Suivi et observation des cultures
- Préparation des échantillons sur les lamelles
- Manipulations délicates ou précises
Le modèle utilisé sur ce site est un Olympus SZ61 monté sur la base Olympus SZX2-ILLTQ, dans laquelle s’insèrent les modules optionnels d’éclairage fond noir (SZX2-CDF) et fond clair (SZX2-CBF). La fiche produit est disponible sur le site d’Olympus. Une caméra EP50 y est installée, complétée d’un anneau lumineux SCHOTT EasyLED Ring Light 600.200 pour l’éclairage incident.
Une base lumineuse offrant le fond noir (dark field) est fortement recommandée. Cette base permet d’améliorer grandement le contraste afin de mieux détecter les hyphes. À défaut de champ noir, un éclairage oblique avec une lampe peut probablement constituer une alternative raisonnable. Voir la section Méthodes d’éclairage pour plus de détails.
Le microscope droit
Le microscope droit est indispensable pour les fines observations et pour l’identification des spores. On l’utilisera pour:
- Observation et photographie de spores sur lame et lamelle
- Observation des racines
- Observation des hyphes et spores
- Suivi de l’évolution des cultures
- Observation du flux cytoplasmique dans des hyphes vivants
Le microscope droit utilisé sur ce site est le Olympus CX43 doté d’un tube trinoculaire pour la caméra.
L’observation des boîtes de Petri au microscope droit se réalise en renversant délicatement la boîte sur le platine. Sceller temporairement les orifices d’irrigation pour éviter que la vermiculite, le polymère ou du liquide ne tombent sur le platine ou le condenseur.
Les observations se font habituellement à travers le plastique du fond de la boîte. Les lentilles 10X et 20X, dont la distance de travail est suffisante, s’utilisent directement. La section « Méthodes d’observation » explique comment utiliser les lentilles 40X, 60X et 100X à immersion dans ce contexte.
Le microscope inversé
Le microscope inversé peut être utilisé pour les mêmes fins que le microscope droit soit:
- Observation et photographie de spores sur lame et lamelle
- Observation des racines
- Observation des hyphes et spores
- Suivi de l’évolution des cultures
- Observation du flux cytoplasmique dans des hyphes vivants
Avantage/inconvénients du microscope inversé par rapport au microscope droit:
Avantages : La boîte de Petri s’observe directement sans être renversé, ce qui élimine toute perturbation du milieu. Aucune préparation n’est requise : on dépose la boîte sur le platine et on observe immédiatement. Les lentilles standard (4X, 10X, 20X et 40X) permettent de réaliser d’excellentes observations.
Inconvénient : Les lentilles courantes du microscope inversé requièrent une longue distance de travail et ont donc une ouverture numérique (NA) plus faible, ce qui réduit la résolution par rapport aux lentilles équivalentes sur microscope droit. Le grossissement usuel ne dépasse pas 40X.
J’utilise un microscope inversé Olympus CKX53 auquel est attaché une caméra en permanence.
Le microscope inversé utilisé sur ce site est le Olympus CKX53 doté d’un tube trinoculaire pour la caméra.
Les lentilles du microscope droit
Consultez des experts avant de choisir vos lentilles. La gamme disponible est très large et les prix varient considérablement. Les lentilles fournies par défaut permettent généralement d’excellentes observations. Pour des publications scientifiques ou des vidéos de haute qualité, un investissement dans des lentilles spécifiques peut toutefois s’avérer justifié.
Pour les suivis visuels et observations sans prendre de mesure.
Les lentilles par défaut sont généralement suffisantes. Combinées à des oculaires 10X, les lentilles 10X et 20X donnent des grossissements de 100X et 200X — amplement suffisants pour le suivi des cultures.
Pour la photographie et la vidéo, le choix entre lentilles de base et lentilles apochromatiques dépend de la qualité requise et du budget. Rappelons que la préparation des échantillons est au moins aussi déterminante que la qualité des lentilles. Les lentilles 100X à immersion servent surtout pour l’étude des structures montées sur des lamelles. Les lentilles apochromatiques offrent un avantage surtout lors d’un agrandissement numérique important, comme l’illustrent les photos suivantes.
Pour les observations détaillées, prises de mesures et photographie
Privilégier des objectifs « Plan » de bonne qualité. Les lentilles 40X et 60X permettent d’excellentes photos ; les 100X sont rarement nécessaires. La qualité finale des images résulte toujours de la combinaison lentille + caméra: une bonne caméra est aussi importante que de bonnes lentilles.
Longue distance de travail:
Pour observer à travers le plastique de la boîte de Petri et atteindre les hyphes en profondeur dans le polymère, les lentilles 40X et plus doivent avoir une longue distance de travail. Cette contrainte réduit toutefois l’ouverture numérique et donc la résolution — un compromis à évaluer soigneusement selon l’usage prévu: Observation sur des lamelles ou à travers une boîte de Petri.
Lentilles apochromatiques $$$
Ces lentilles sont idéales pour la photographie haute définition à fort grossissement. À l’œil nu dans l’oculaire, la différence entre une lentille achromatique et apochromatique n’est pas très grande. C’est lors du zoom numérique sur les photos que l’avantage devient clairement visible, comme l’illustrent les deux photos suivantes du même hyphe.
5 UIS2 Apochromatique.
Que penser des lentilles chinoises sur AliExpress ?
Les fabricants chinois produisent des objectifs allant de l’excellent au médiocre, souvent à bas prix sur AliExpress. La difficulté réside dans l’identification des bons fournisseurs — et je n’ai pas de références précises à ce sujet. L’objectif illustré ci-dessous, provenant de Olympus mais fabriqué en Chine, est d’excellente qualité, mais son prix n’était pas particulièrement bas.
